甲苯胺红血清试验与酶联免疫吸附试验在妊娠期女性梅毒筛查中的应用对比
文章导读:选取妊娠期女性1529例作为研究对象,采用梅毒特异性抗体检测法判断孕妇是否感染梅毒,并据此分为感染梅毒的观察组(n=14)和未感染梅毒的对照组(n=1515)。分别采用TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)、ELISA(酶联免疫吸附试验)、TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)进行检测,并对结果进行比较和分析。结果:TRUST、ELISA、TPPA敏感性分别为64.29%、85.71%、100.00%,阳性预测值分别为56.25%、85.71%和100.00%,TPPA>ELISA>TRUST,三种检测方法差别有统计学意义(P<0.05)。TPPA敏感性和特异性均高达100%,其阳性患者14例标本滴度为1∶16~1∶128,其余患者标本滴度均≤1:4。通过pearson直线相关性分析,TRUST法滴度与ELISA法A值之间没有明显的相关性(r=0.391,P>0.05);TRUSR法与TPPA法滴度具有明显的相关性(r=0.927,P<0.05)。 |
梅毒是由梅毒螺旋体感染所致的慢性全身性传染性疾病,性传播和母婴传播是最为常见的传播途径。近年来,随着性观念开放与性行为保护意识的不足,梅毒发生率越来越高,妊娠梅毒以及胎传梅毒的发病率也逐年上升。胎传梅毒可以导致流产、死胎、早产、胎儿畸形以及分娩先天梅毒患儿等严重后果。有效的预防以及控制梅毒传播是产前保健的重要内容,而对携带梅毒螺旋体的孕妇进行准确、快速的筛查是采取预防措施的关键。本研究回顾分析了1529例孕妇的临床资料,对不同梅毒检测方法筛查结果进行统计,现报告如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
选取2014年5月至2014年9月期间来我院行产前检查的孕妇1529例作为研究对象。其中14例孕妇通过梅毒特异性抗体检测确诊为梅毒,其余1515例为梅毒阴性。所有孕妇年龄20~37岁,孕周16~20周。
1.2方法
TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)试剂来自上海荣盛神武技术有限公司。所有孕妇于清晨抽取肘静脉空腹血3mL,室温下静置凝固之后取血清。取50μL血清放在卡片的圆圈中并均匀涂布,轻轻摇匀TRUST抗原,使用9号针头加一滴抗原,使用水平旋转仪旋转卡片8min,立即在亮光下进行观察。对于TRUST试验阳性的患者使用0.9%NaCl溶液倍比稀释血清后测定反应素,以可以引起阳性反应的最高的稀释度作为反应素滴度。以TPPA法作为确认试验。以圆圈内出现红色或粉色絮状物为阳性,以圆圈内仅见甲苯胺红颗粒集于中央一点或均匀分散为阴性。
此外ELISA(酶联免疫吸附试验)以及TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)所需试剂分别来自上海科华生物有限公司以及日本富士瑞必欧株式会社,且使用时均在有效期内,所有操作以及结果判读均按试剂盒说明进行。三种检测方法同时进行。
1.3 试剂评价指标
以观察组阳性例数/观察组总例数为敏感性;对照组阴性例数/对照组总例数为特异性;以观察组阳性例数/两组阳性总例数为阳性预测值;以对照组阴性例数/两组阴性总例数为阴性预测值。
1.4 统计学处理
采用SPSS13.0软件进行分析,计量资料采用t检验,不同筛查方法敏感性、特异性采用χ2检验,采用pearson直线相关分析进行相关性检验,且以 P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 不同筛查试剂检测结果
TRUST、ELISA敏感性分别为64.29%、85.71%,阳性预测值分别为56.25%、85.71%,TPPA>ELISA>TRUST,三种检测方法差别有统计学意义(P<0.05)。
2.2 滴度相关性
TPPA敏感性和特异性均高达100%,其阳性患者14例标本滴度为1∶16~1∶128,其余患者标本滴度均≤1∶4。通过pearson直线相关性分析,TRUST法滴度与ELISA法A值之间没有明显的相关性(r=0.391,P>0.05);TRUSR法与TPPA法滴度具有明显的相关性(r=0.927,P<0.05)。
3 讨论
梅毒由梅毒螺旋体感染所致,具有高度的传染性。孕妇如果合并梅毒而不及时进行治疗,可以引起胎儿肝、肺、脾以及骨骼等器官和组织发生病变,影响妊娠结局,因此危害极大。我院2014年5月至2014年9月期间行产前检查的1529例孕妇中检出梅毒患者14例,检出率高达0.92%,因此做好孕期梅毒筛查有着重要的意义。
由于妊娠期女性体内免疫系统处于抑制状态,很多孕妇即使感染梅毒,也没有明显的症状和体征,在这种状况下血清学检查是诊断梅毒的重要依据。
梅毒螺旋体感染人体之后可致机体产生两种抗体,其中特异性抗体在感染2~4周后可以检出,另一种是梅毒螺旋体对患者组织造成破坏之后释放出来的非特异性抗体,又称为反应素,检出的时间与特异性抗体相比要晚2周左右。
TPPA法是在明胶颗粒外包被纯致病性梅毒螺旋体特异性抗原,梅毒感染者血清中的抗体可以和致敏颗粒发生特异性的反应而出现凝集现象,而且凝集的强度与抗体的浓度呈现出正相关,是目前公认的梅毒感染确诊试验,但是在进行测定时需要反复进行稀释,操作复杂,并不适合大批量的进行测定;而且由于检测结果需要通过肉眼进行判断,因此对于操作人员的要求也较高,而且试剂昂贵,在溶解之后必须在短期内用完,否则就会造成浪费,因此用于基层医院筛查很难推广。
TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)是针对非特异性抗体所进行的检测,具有操作简便、用时短、试剂成本低的优点,目前在临床应用较为广泛,但是在本研究中,我们发现,其敏感性和阳性预测值分别仅有64.29%和56.25%,5例患者出现了假阴性,漏检率高达35.71%,这可能一方面与非特异性抗体出现较晚有关,另一方面梅毒晚期此类抗体可以部分转阴也会影响到治疗的敏感性。此外,当采集标本时如果有人类脂质混入或因细菌污染、溶血等因素而导致血清中游离脂肪酸析出,则有可能引起结果的假阳性,在本研究中未感染梅毒螺旋体的孕妇中有7例患者出现假阳性。这都提示我们TRUST用于妊娠期梅毒筛查是容易造成漏诊和误诊的,并不适合。但是在滴度相关性检查时我们发现,TRUSR法与TPPA法滴度呈现明显的正相关,因此当确诊孕妇感染梅毒之后,对其治疗效果以及是否有复发和再感染,使用TRUST定量滴度是有效的。
ELISA法是一种双抗原夹心试验,通过基因重组表达的方式对血清中的特异性抗体进行测定,操作简单,而且结果稳定,可以使用酶标仪判读结果,因此相对而言是客观而且准确的。在本研究中使用ELISA法进行测定敏感性达到85.71%,虽然有2例患者出现假阳性,但是较TRUST法已经明显减低。由于在进行ELISA检测的同时也会对IgG和IgM进行测定额,人梅毒患者虽然经过足量治疗,但是IgG水平仍然会长期保持阳性,因此ELISA测定A值与TRUST法的测定并没有相关性,也不能作为评价治疗效果以及是否复发的指标。
由于梅毒传播方式的特殊性以及其对妊娠所造成的不良影响,一旦出现假阳性,会给孕妇造成极大的心理压力甚至引发家庭矛盾,且因为延误治疗而给社会和家庭造成巨大的经济和精神损失,因此选择适宜的筛查模式有着重要的意义。与TRUST相比ELISA的敏感性更高,但是也有可能出现漏检和假阳性,临床工作中可以根据自己实验室的条件,必要时选择联合测定。
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