Half-ICSI受精完全失败1例分析
文章导读:2015年11月在本院接受辅助生殖治疗的一女患者,采用拮抗剂方案促排卵后,阴道B超监测下穿刺取卵,获得14枚卵母细胞,因患者原发不孕且行3次IUI治疗未孕,男方原发不育,采取Half-ICSI受精方法,预防受精失败。结果:14枚卵母细胞仅见第一极体排出,未见第二极体和双原核,Half-ICSI受精完全失败。 |
在人类辅助生殖技术中,卵母细胞体外授精的方式有两种:IVF授精和卵细胞浆内单精子显微注射受精(ICSI)。当IVF受精低下或受精完全失败时,可以通过采用ICSI受精方式来改善受精结局。但是ICSI完全受精失败病例在临床少见,本中心于2015年11月对一患者行取卵手术, 采取Half-ICSI(一半卵母细胞行IVF受精,一半卵母细胞行ICSI)受精方案,结果受精完全失败,现结合有关文献就该病例进行分析。
1 资料与方法
1.1 一般资料
患者女30岁,主诉:婚后3年未孕,腹腔镜术后半年,3次IUI未孕。性生活正常,月经:5~7d/35~45d,经量正常,轻度痛经,B超检测排卵正常。2013年11月HSG示:右侧输卵管通畅,左侧输卵管轻度扩张,通而不畅。2015年4月腹腔镜下盆腔内异症电凝+宫腔镜检查+双侧输卵管插管通水+诊刮术。术中见:双侧输卵管通畅,双侧骶韧带多枚内异症灶;宫腔内见多枚息肉样组织,行诊刮后病理回报:增生期子宫内膜。女方诊断:原发不孕,子宫内膜异位症腹腔镜术后。男方30岁,2015年男方精液常规分析两次,均按照WHO第四版标准进行精液评估,第一次分析示:量3mL,pH7.4,液化30min,密度105×106/mL,活率93.8%,精子活力a+b为70.5%,精子正常形态率25%。第二次精液分析示;量3.0mL,pH7.4,液化30min, 密度209×106/mL,活率93.8%,精子活力a+b为82.4%,精子正常形态率28%。其它检查:精子核DNA碎片5%(参考值<10%),精子顶体酶活性定量检测:148.2 μIU/106(参考值48.2~218.7μIU/106精子),精子膜抗体实验:0(参考值<10%),精子Y染色体微缺失基因检测:未见异常。染色体核型:46,XY。男方诊断:原发不育。
1.2 方法
1.2.1 促排卵方案 患者采用拮抗剂方案促排卵,月经第3d给予促性腺激素(果纳芬,默克雪兰诺有限公司,进口药品注册证号S20130055))150U促排,6d后B超监测卵泡发育至14mm,加上促性腺激素释放激素拮抗剂(思则凯,默克雪兰诺有限公司,进口药品注册证号H20140476)0.25mg/支,1次/d,继续监测卵泡发育和血性激素变化,促排卵12d后B超监测见成熟卵泡≥18mm 2枚,予短效促性腺激素释放激素激动剂(达必佳,辉凌瑞士制药有限公司,进口药品注册证号H20100365 )0.2mg 1次性肌注,35h后阴道超声监测下穿刺取卵。
1.2.2受精方法 取卵当日,实验室获得14枚卵母细胞,同时男方手淫取精,精液处理采用密度梯度离心法+上游法。由于患者原发不孕,3次IUI未孕且男方精液分析正常,采用half-ICSI受精方式。IVF受精(短时):取卵后2~4h受精,7枚卵子加入处理后精液行常规IVF受精(3037法),精卵共同孵育5h后去除颗粒细胞;ICSI受精:7枚卵子脱颗粒细胞后均为MⅡ期,即进行ICSI。
2 结果
18~20h观察受精情况,倒置显微镜下:14枚卵母细胞仅见第一极体,未见第二极体和双原核,继续培养24~48h观察仍未有变化,受精完全失败。
3 讨论
受精是一个复杂的过程,包括精子的获能、精子透明带的结合、精卵融合、第二极体释放及原核形成等,任何一个环节的错误,均可导致受精失败。在IVF-ET治疗中,有5%~10%完全受精失败,卵子因素并不是IVF完全受精失败的常见原因,因为卵泡刺激方案很少导致所有卵子完全异常,IVF完全受精失败,最常见的原因是精子无法穿透成熟卵母细胞进入胞浆。为了避免IVF受精低下或完全受精失败,近年来,研究者们采用常规IVF短时受精+早期补救ICSI、half-ICSI等方法,取得较高的受精率和卵裂率,避免周期取消。然而ICSI技术不能解决所有的受精失败,Esfandiari等报道ICSI全部受精失败TFF(total fertilization failures, TFF),发生率为1.3%~3.0%。本病例中14枚成熟卵母细胞,倒置显微镜下观察:卵母细胞形态正常,胞浆颗粒较均匀,第一极体形态较规则,透明带光滑,厚度适中。男方精液分析正常,精子核DNA碎片、精子Y染色体微缺失基因检测、染色体核型及精子顶体酶活性定量检测均未见异常。基于目前文献报道,很大部分ICSI受精失败的病例与卵子的质量没有明显的关系,大多数受精失败原因与精子的质量有关,推测可能该男子的精子缺乏某种因子,不能使精子激活女方卵母细胞。有研究表明,精子对卵母细胞的激活失败是约40%的ICSI未受精卵失败的原因,对于精子如何激活卵母细胞的问题,有三种主要的假说:Ca2+通道假说、受体假说和精子因子假说,更多学者支持第三种假说。精子的赤道板区含有一种特殊的卵磷脂酶C(PLC zeta) ,可以诱发胞内Ca2+库的释放以及Ca2+震荡的发生,而且Ca2+震荡刺激线粒体呼吸作用,产生ATP来维持精子入卵触发的钙波,Yoon等发现缺乏PLC zeta的精子则不能诱发钙震荡,从而导致受精失败。如果ICSI受精失败是因卵子没有被活化所致,文献报道4种方法能够帮助卵子活化:①化学活化法:将ICSI后的卵子放入含有转钙离子载体(calcium ionophoreA23187)的培养液里培养10~15min,然后将卵子转入标准的培养液中继续培养。②ICSI注射精子时用含高浓度钙离子的培养液(15~20mmol/L),用注入高浓度的钙离子帮助卵子活化。③机械辅助活化法(改良ICSI方法):做ICSI时,把精子注入卵子后,将注射针尖靠近卵质膜,比较强烈的吸卵浆,然后打出去,如此反复几次,是目前ICSI受精失败后最常用的活化卵子的方法;④电诱导活化卵子。卵母细胞辅助激活技术联合ICSI应用于ICSI受精低下或完全受精失败的患者,已有健康婴儿出生的报道,但由于病例有限,目前还处于实验性阶段,其作用的效果尚没有大规模临床研究。对本文病例的后续治疗,拟再次促排后行ICSI,采用机械辅助法活化卵子。即在做ICSI时,先用力制动精子尾部,使尾部明显打折;精子制动是卵子激活的另一个因素,损伤精子尾部将增加精子膜渗透性,在注入精子后,比较猛烈的抽吸胞浆,反复几次,理论上可影响卵母细胞内Ca2+的震荡,与卵子激活有关。但是,其应用缺乏大样本,反复猛烈抽吸胞浆是否对卵母细胞造成损害,以及上述方法能否有效的解决ICSI受精失败,还有待深入研究。
来自《中国性科学》杂志 转载请注明出处