精子DNA碎片率与AIH或IVF-ET临床妊娠率的相关性
文章导读:筛选因常见男性因素为主行AIH的患者64例及IVF-ET的患者46例,其中女方的促排方案相同,男女年龄均在40岁以下,平均年龄(31±9)岁,基本排除女方常见不孕因素。根据术中精子DNA碎片率的高低,分为五组:组1:术前3个月内精子DNA碎片检查结果正常组,24例(AIH, 16例);组2:术前精子DNA碎片检查结果异常,经治疗后好转组,44例(AIH, 30例);组3:术前精子DNA碎片检查结果异常,经治疗后未见明显好转或拒绝治疗组,22例(AIH, 10例);组4:术前未做精子DNA碎片率检查,术中留取精液检测结果异常组,10例(AIH, 4例);组5:术前未做精子DNA碎片率检查,术中留取精液检测结果正常组,10例(AIH, 4例);分别统计各组AIH及IVF-ET的临床妊娠率,计算两者均值,并比较各组差异。结果:组1、组2、组3、组4、组5妊娠率分别为37.5%、31.8%、31.8%、20.0%、45.5%。 |
随着辅助生殖技术的日益成熟,各个生殖中心都在致力于如何更安全、经济、高效的提高助孕成功率的研究中。反复的失败对于患者,无论从精神、肉体上还是经济上都是很大的打击。而助孕的成功除了要获得高质量的卵子和良好的种植环境之外,男方精子因素也是优质胚胎形成的一个重要方面。目前多数生殖中心仅仅把女方促排因素及胚胎实验室环境和胚胎师操作作为分析助孕失败的因素,认为助孕中男性配子只要拥有足够数量及活力就可以了,其实这是很片面的。作为携带了人类一半遗传物质的精子而言,尤其是对多年不育的男性患者的精子而言,单纯数量和活力正常是不能代表此类男性生育能力的。辅助生殖技术的广泛开展以来,精子功能的评估不仅局限于精液常规分析,而是向细胞、分子水平逐步深入,但目前临床上评估男性生育能力的基本指标仍是精液常规分析。而精液常规分析的局限性逐渐显现。有报道显示在临床上有很大部分不能生育男性的精液常规参数是正常的。很明显我们急需能更全面、更客观,更准确的评估男性的生育能力的实验室参数。精子DNA碎片率(%)=存在DNA碎片的精子数÷被观察的精子总数×100%。有研究数据提示,精子DNA损伤影响男性生育的不同阶段,可能与受精率、胚胎发育、种植率、妊娠率、流产率以及后代的先天性异常等有关。影响辅助生殖技术最后临床妊娠率的因素众多,其中女方因素是至关重要的一个方面,目前多数有关精子DNA碎片率与辅助生殖技术临床妊娠率的相关研究中,没有采取适当的规避女性因素的方案,因此评估不太客观。本研究筛选临床诊断中女方因素基本正常的夫妇,更能客观的分析精子DNA碎片率与辅助生殖技术临床妊娠率的相关性,从而为辅助生殖技术中男性的精子准备起到指导作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料
从2014至2017年间于衡水市哈励逊国际和平医院采取AIH及IVF-ET技术助孕的不孕不育夫妇中,按以下要求筛选病例:(1)年龄40岁以下;(2)男方诊断为少、弱、畸精子症、性功能障碍或其自由组合的合并症;(3)女方卵巢功能、内膜、子宫及输卵管解剖因素均诊断正常,BMI在18~24kg/m2,IVF取卵数5个以上;(4)术中精子优化提取均采用的是密度梯度离心法,操作者为同一人。精子处理完后前向运动的精子数>10×106/mL;(5)术中所有耗材来自相同的供应商,并质控合格。经医院伦理委员会论证许可,最后共筛选合格病例110例,平均年龄(31±9)岁,其中AIH周期64例,IVF-ET周期46例。
1.2 方法
1.2.1 分组方法
统计筛选出病历中男方精子DNA碎片率,分为五组。组1:术前3个月内精子DNA碎片检查结果正常组,24例(AIH, 16例);组2:术前精子DNA碎片检查结果异常,经治疗后好转组。治疗方案:复方玄驹胶囊(施强药业,国药准字:Z20060462)联合左卡尼汀口服液(东北制药,国药准字:H19990372),44例(AIH, 30例);组3:术前精子DNA碎片检查结果异常,经治疗后未见明显好转或拒绝治疗组,22例(AIH, 10例);组4:术前未做精子DNA碎片率检查,术中留取精液检测结果异常组,10例(AIH, 4例);组5:术前未做精子DNA碎片率检查,术中留取精液检测结果正常组10例(AIH, 4例)。分别统计各组AIH及IVF-ET的妊娠率,并比较各组差异。
1.2.2 精子碎片率
检测采用安科生物科技有限公司精子DNA碎片试剂盒(SCD法),严格按照说明书操作步骤进行操作,结果由实验室经验丰富的2名检验人员分别计数,差异在95%可信区间,采用二人结果平均值作为最后结果。二人差异过大,重新计数。精子DNA碎片率<10%,属于正常;10%~15%,表示男性生育力有降低趋势,无论是自然妊娠还是IUI助孕成功率有可能降低;精子DNA碎片率>15%,表示男性生育力低,无论是自然妊娠还是IUI助孕成功率都很低,且IVF/ICSI助孕流产的风险增加。本研究认为精子DNA碎片率>10%即为异常,便进行药物干预和饮食、生活作息指导。
1.2.3 女方促排卵方案
IVF周期:月经周期第21d皮下注射曲普瑞林降调节。达到降调标准后,促排卵药物诱导卵泡发育。卵泡直径≥18mm时,肌注HCG 10000U,34~36h后取卵。取到卵子行体外受精后24~72h,观察受精卵的细胞分裂情况,并评分。第3d优质胚胎移植,而后14d查血HCG验孕。确认生化妊娠后,移植第5周行阴道B超检查确认是否临床妊娠。AIH周期:均采用来曲唑联合人绝经期促性腺激素促排。术后14d行血HCG检测,确定是否生化妊娠。确认生化妊娠再于AIH后5周行阴道B超检查确认是否临床妊娠。
1.2.4 统计学分析
采用SPSS20.0统计软件进行数据计算分析,计数资料各组临床妊娠率比较采用χ2检验,P<0.05时差异有统计学意义。
2 结果
组1、组2、组3、组4、组5妊娠率分别为37.5%、31.8%、31.8%、20.0%、45.5%,五组妊娠率两两比较均无统计学差异(P>0.05)。其中组3及组4分别有4例和1例生化妊娠,而始终未监测到宫腔内妊娠囊及原始心管搏动。组1和组2则未出现这种情况。
3 讨论
目前临床上经常发现一些不育夫妇女方找不到明确因素,男方反复的检查精液常规,而常规结果并无异常,此类人群即被定为特发性不育或不明原因不育。其实随着男科的不断发展,男性不育领域的深入研究,不难发现男性精液常规检查正常的男性生育力不一定就是正常的,精子除了数量、活力达到相关标准之外,还要有足以完成受精过程的良好的功能。辅助生殖技术的广泛开展似乎成为了男性不育的核武器,甚至很多业界人士也认为,既然要做辅助生殖技术了,男性在助孕之前没有必要做什么准备,只要定期精液常规检查保证有精子就好了。不过随着试管婴儿体外受精过程中精卵直接接触不受精现象屡屡发生,生殖专家们除了排查女方卵子因素和实验室操作因素外,还要从精子方面也找找原因:本研究致力于精子DNA碎片率对辅助生殖临床妊娠结局的影响。研究结果显示:在尽量排除女方因素的同时,过高的精子DNA碎片率对AIH及IVF-ET临床妊娠率会产生明显的影响,经过规律的改善精子DNA碎片率的药物等治疗,可以显著增加助孕成功率。这与之前很多研究结果基本相符。做好男方助孕前的精子准备,降低精子DNA碎片率切实必要。精子DNA碎片产生的原因主要有精子发生过程中的染色质包装异常、氧压胁迫、凋亡异常等,另外其与吸烟、酗酒、空气污染、年龄等环境因素相关,DNA碎片化的精子会与卵子发生原核障碍,无法正常结合,从而降低受精率。因此建议助孕的男性做好精液常规检查的同时,筛查精子DNA碎片率,对结果异常的患者提前采取饮食及生活方式改良、药物针对性治疗,会大大提高助孕成功率。之前有关精子DNA碎片率与ART临床妊娠率相关性的研究众多,但临床妊娠率和女方因素有很大关系,女性的年龄、不孕因素、卵巢功能、不孕年限、输卵管因素、子宫内膜因素等等均会对助孕结局产生影响。本研究通过对助孕病历的回顾分析,尽量挑选以男性因素为主、女方因素基本排除的病例,更能客观的分析精子DNA碎片率对助孕结局的影响,对如何做好助孕前的精子检查和精子准备有重要意义。
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