翘芍止泄合剂对肝郁模型大鼠性行为及中枢5-羟色胺的影响
文章导读:目的:建立肝郁动物模型,观察翘芍止泄合剂对模型大鼠性行为和5-羟色胺(Serotonin ,5-HT)的影响,探讨其作用机理。结果:造模后,大鼠插入潜伏期延长,插入次数、射精潜伏期均缩短,中枢5-HT含量降低,差异有统计学意义(P<0.01),而给药组潜伏期缩短(P<0.01),插入次数、射精潜伏期均延长(P<0.01),中枢5-HT含量升高(P<0.05)。结论:肝郁证雄性大鼠性行为的改变与中枢5-HT的含量有关,翘芍止泄合剂能够提高中枢5-HT的含量,可能是提高性功能的作用机制之一。 |
早泄(prematμre ejacμlation,PE)是最常见的性功能障碍疾病,目前还没有统一的诊断标准,因此发病率报道不一,约有1/3男性存在着不同程度的早泄。中医药是我国的医疗特色,在早泄治疗中应用广泛。我们临床中采用翘芍止泄合剂治疗早泄取得较好疗效,为进一步探讨其作用机制,进行初步的动物实验研究,报告如下。
1 实验材料
1.1 实验动物
健康成年Wistar大鼠60只,体重200~230g,其中雄性36只,雌性24只,由医学实验动物中心提供。合格证书编号:2009LA-086。实验过程中动物自由摄食和饮水(禁食、禁水应激除外),室温18℃~24℃(冷、热应激除外),相对湿度60%~70%。
1.2 实验药品
翘芍止泄合剂为中国中医科学院西苑医院男科协定处方,组成及剂量:贯叶连翘20g、郁金15g、柴胡15g、白芍15g、菖蒲5g、巴戟天15g、黄芪10g,水煎剂,全部药材中药房提供,并经中药鉴定室鉴定为真品。于实验室制成浓缩液350ml,每ml含生药3g。装瓶,高温灭菌,置4℃冰箱储存备用。
1.3 实验仪器与试剂
960CRT荧光分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);RSOA型全血粘度测试仪(北京中勤世帝科技公司);KR-180FA型高速冷冻离心机(日本久保田制作所);5417R低温离心机(德国eppendorf公司);HZ-2256型水浴恒温振荡器; T-1000型电子天平(感量0.19);SartorμsBP-61型电子天平(感量0.1mg)(德国Sartorius公司)。
2 实验方法
2.1 动物分组及处理
Wistar大鼠36只,饲养7d后,按随机数字表法分为正常组、模型组和翘芍止泄合剂组,共计3组,每组12只。正常组每笼饲养6只,其余组每笼饲养1只。取雌性大鼠24只,在戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉下,行双侧卵巢摘除术,术后肌注氨苄青霉素钠50mg/kg,连续给药3d,以防感染;摘除卵巢后2周进行交配试验。试验前48 h皮下注射苯甲酸雌二醇20μg/只,4 h前再注射黄体酮注射液50μg/只。用沾有生理盐水的棉签取阴道分泌物涂片,筛选出发情雌鼠备用。
2.2 模型制作
参照文献,模型组、给药组大鼠带上用有机玻璃制作的类似颈部枷锁形模具,模具的大小可根据大鼠颈的周径来调整。大鼠带模具后暴跳、抓咬笼具及模具、不断嘶叫。随着造模时间的延长反应较前迟钝,行动迟缓,伴有叫声尖细,胡须下垂,眼睛眯小,眼神呆滞,毛色枯黄,食少,粪便小、干、少。15 d后,除前述表现外,目色暗红、行走贴边、扎堆、激惹呈逃避反应等行为改变。
2.3 给药方法
给药组:予翘芍止泄合剂浓缩液,按17.5g生药/kg体重(相当于l临床人用量105g生药/60kg·d的10倍)灌胃,每日1次,共2周。正常组:予蒸馏水10ml/kg体重灌胃,每日1次,共2周。模型组:予蒸馏水10ml/kg体重灌胃,每日1次,共2周。
2.4 测试指标与方法
2.4.1 性行为观察于夜间进行观察,先将一只雄性大鼠放入一暗箱内(暗箱的顶面与底面各制一圆形的开口,并且在暗箱下面放一丙烯树脂制成的半透明箱,箱内设置15瓦红色灯泡照明),使其适应环境10min后,再放入一只发情雌鼠,开始记录下列指标:插入潜伏期:自雌鼠放入至雄鼠第一次出现插入动作的时间。射精潜伏期:自雄鼠初次插入动作开始至出现射精动作时间。射精次数:记录30min内雄鼠插入雌鼠阴道射精的次数。
2.4.2下丘脑5-羟色胺(5-HT)的测定观测结束后将大鼠断头处死,去颅骨,完全暴露脑组织,在枕骨大孔处迅速剪断延髓,在冰上迅速剥离大脑,取脑组织,称重后置离心管中,保存于-70℃的冰箱中。样品中分别加入0.06 mol/L的二羟苄胺(DHBA)20μl,0.1mol/L的高氯酸(HCLO4)380μl。固体样本冰浴条件下超声匀浆30s。常温下11000转/min离心10min,取上清液10μl进行测定,采用高效液相色谱系统(HPLC)加电化学检测器(ECD)检测脑组织5-HT的含量。
2.5 统计学处理
数据用SPSS12.0 软件,结果以x±s 表示,组间比较采用One-way ANOVA分析,方差不齐时采用成组设计多样本的秩和检验,统计显著性水平为P<0.05。
3 结果
3.1 翘芍止泄合剂对肝郁雄性大鼠模型性行为的影响
模型组大鼠在插入潜伏期、插入次数及射精潜伏期均出现变化,有统计学差异,而治疗组能够改善这些相关指标。
3.2 翘芍止泄合剂对肝郁雄性大鼠模型中枢5-HT含量的影响
模型组大鼠中枢5-HT含量降低,差异有统计学意义,而给药组能够提高其水平,差异有统计学意义。
4 讨论
近来研究结果表明早泄发生与中枢的5-HT系统功能异常有关。当5-HT系统的功能缺陷时,表现出大脑皮层对一种正常生理刺激的高敏感性和高兴奋性。抗抑郁剂可通过抑制5-HT的重吸收,增加5-HT的神经传导,达到治疗早泄的作用。5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)作用机制是选择性阻断5-HT再摄取,提高中枢神经系统5-HT浓度,从而延长射精潜伏期。
中医学对早泄早有论述,如《沈氏尊生书》载有“未交即泄,或乍交即泄”,并积累了丰富的临床经验,认为本病的发生与心、肝、肾关系最为密切,三脏共司精关之开合,与精液的闭藏和施泄密切相关。心火旺盛、肾精亏虚,肝失疏泄,则精关约束无权,即发生早泄。翘芍止泄合剂为中国中医科学院西苑医院男科协定处方,由贯叶连翘、郁金、柴胡、菖蒲、白芍、巴戟天、黄芪组成,具有清心、疏肝、补肾、固摄精道的功效。连翘与郁金,均性寒,归心,肝经,长于清热凉血,清心解郁之功效,两者合用共为君药,则心经之火去而肾经不留邪。石菖蒲入心经,开心窍、益心智、安心神;柴胡与白芍共凑舒肝理气之功效;巴戟天补肾壮阳;黄芪补气升阳、益气固本,以制泄精之忧。国外研究表明,贯叶连翘的有效成分贯叶金丝桃素对麻醉状态下大鼠5-羟色胺激动剂所诱发的射精有延迟的作用,通过后尿道-球海绵体反射肌电图检查可以发现。另外现代药理研究发现巴戟天明显增强LTP(突触传递长时程增强)效应,兴奋5-HT神经系统,而5-HT是性行为的重要神经递质,具有抑制射精的作用。研究发现白芍提取物70mg·kg-1·d-1、35mg·kg-1·d-1剂量能显著改善模型大鼠的行为学变化,增加大鼠脑内去甲肾上腺素、5-HT含量(P<0.05),具有对中枢单胺类神经递质的调节作用。李亚明等发现石菖蒲水煎剂在行为绝望动物抑郁模型上有明显抗抑郁作用,其作用机制可能通过 5-HT系统起作用,可见目前的药理学研究有本方中的众多药物具有提高中枢5-HT的作用趋势,本实验在上述临床及药理学基础上进行了肝郁大鼠模型性行为及中枢5-HT含量的观察,大鼠造模后出现了性功能的异常,主要表现为早泄现象,给予翘芍止泄合剂干预后发现,能够提高性功能,改变射精潜伏期,且升高中枢5-HT含量,这可能是翘芍止泄合剂作用机制之一。
来自《中国性科学》杂志