男性年龄与体外受精-胚胎移植治疗结局的相关性分析
文章导读:按照男方年龄将接受常规IVF-ET治疗的188对夫妇分为四组:年龄<31岁组53例,31~35岁组78例,36~40岁组37例,>40岁组20例。分析男方年龄对IVF-ET治疗结局的影响。结果:本研究中各组间女方年龄、不孕年限、内膜厚度、基础FSH值、Gn总量、获卵总数、MII卵数、可移植胚胎率、优质胚胎率等结果比较均无显著性差异(P>0.05),男方精液体积、精子密度、前向运动精子比率均无明显差异(P>0.05),36~40岁组(9.3±3.0)和>40 岁组(9.5±2.6)的正常形态精子比率显著低于<31岁组(13.5±2.8)和31~35岁组(12.6±2.7) (P<0.05),而且36~40岁组的受精率(76.6%)显著低于<31岁组(83.1%)和31~35岁组(81.4%)(P<0.05)。另外,<31岁、31~35岁、36~40岁、>40岁组的着床率分别为:50.91%、41.32%、21.35%、23.4%(P<0.05),妊娠率分别为64.15%、62.82%、40.54%、45.0%(P<0.05),均呈一定的下降趋势。而各组间的流产率无显著差异(P>0.05)。 |
很多研究已经表明,女性年龄的增长会对妊娠结局产生不利影响,导致受精率降低、胚胎着床率降低、流产率升高。这种生育力的下降主要是由于卵子和胚胎的染色体异常的增多造成的。相比之下,男性年龄对生殖潜能影响的研究比较少,而且男性年龄对IVF结局的影响存有争议。本文旨在研究男性年龄对常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的临床结局的影响。
1 资料和方法
1.1 研究对象
选取2012年6月至2015年6月在我院接受体外受精胚胎移植治疗的1639个周期进行筛选,纳入标准:(1)单纯输卵管因素不孕;(2)女性年龄<35岁;(3)继发不孕;(4)标准长方案降调节。排除标准:(1)基础卵泡生成素(FSH)水平>10mIU/mL;(2)基础窦卵泡数<8个;(3)获卵数≤4枚。经过筛选,共有188对夫妇纳入研究,其中男方年龄23~56岁,按照男方年龄分为四组:<31岁组53例、31~35岁组78例、36~40岁组37例、>40岁组20例。
1.2 研究方法
1.2.1 精液分析 男方禁欲2~7d,以手淫法取精于洁净的专用取精杯中,待其液化后按照《人类精液检查与处理实验室手册》WHO第5版标准进行精液常规分析及精子形态学分析。精子形态学分析采用Diff-Quik试剂进行染色,100倍油镜下观察不少于200个精子并进行严格的形态评估,分别记录正常形态、头部畸形、颈部及中段畸形和尾部畸形精子的个数,最后计算出正常形态精子占全部计数精子的百分率。
1.2.2 控制性促排卵 控制性促排卵方法参照以前文献所述,当有2个以上优势卵泡直径达到20mm时,注射绒毛膜促性腺激素(hCG)250μg,36~37h后经阴道B超引导下取卵,获得的卵子置于37℃、6%CO2培养箱内待授精。
1.2.3 精液处理、体外受精-胚胎移植方法 参照以前文献所述,男方取精后1h之内,采用密度梯度离心及上游法处理精液,处理后置于CO2培养箱中待用。取卵后4~6h,向装有卵子的四孔皿中加入精子,使精子的最终密度为10万条a+b级精子/卵子,置37℃、6%CO2培养箱中进行过夜培养。授精后16~20h剥除颗粒细胞并观察卵子受精情况。取卵后48h、72h观察卵裂及胚胎发育情况,并进行卵裂期胚胎评级,选择评级较高的胚胎在B超引导下进行胚胎移植。本中心优质胚胎评判标准为:正常受精(2PN)来源,第2d为3~5细胞,第3d为7~9细胞,碎片≤20%,卵裂球大致均一且无多核、空泡等现象。移植后14d验尿和血hCG为阳性,则确诊为生化妊娠;移植后4周超声见妊娠囊则确诊为临床妊娠。
1.3 统计学分析
结果用SPSS统计软件包进行分析,计量资料以(x±s)表示,采用单因素方差分析。率的比较采用χ2检验,P<0.05认为有统计学差异。
2 结果
2.1 四组患者基本情况比较
四组患者在女方年龄、不孕年限、内膜厚度、基础FSH等基本情况方面无显著性差异(P>0.05)。
2.2 四组患者控制性促排卵及获卵情况比较
四组患者在降调天数、Gn天数、Gn总量、获卵总数及MII卵数等方面的差异均无显著性(P>0.05)。
2.3 四组患者精液分析结果比较
四组患者在精液体积、精子密度及前向运动精子比率方面无显著性差异(P>0.05),但是36~40岁组和>40 岁组的正常形态精子比率显著低于<31岁组和31~35岁组(P<0.05)。
2.4 四组患者体外受精胚胎移植结局的比较
36~40岁组的受精率显著低于<31岁组和31~35岁组(P<0.05),>40岁组的受精率也低于<31岁组和31~35岁组,但是差异并不显著,四组患者的2PN受精率、多精受精率、可移植胚胎率、优质胚胎率及流产率无统计学差异(P>0.05)。同时,36~40岁组和>40岁组的着床率和妊娠率都分别显著低于<31岁组和31~35岁组(P<0.05)。
3 讨论
众所周知,女性高龄会对生育产生不利影响。随着女性年龄的增长,卵泡储备逐渐下降,卵子染色体异常比率逐渐增高,这可能是卵子胞浆老化和减数分裂过程中非整倍体增多的结果。对于接受助孕治疗的女性来讲,年龄是影响妊娠结局的一个最重要指标。文献显示,女性年龄达到40岁时,助孕成功率急剧下降,同时获卵数、受精率和着床率均明显下降。相对于女方年龄来讲,男性年龄对辅助生殖技术(ART)结局影响的研究比较少,而且结果不一致。在不孕症患者中,男性因素大约占40%,说明精子质量对生育极为重要。文献显示,男性年龄大于40岁时其在12个月内使配偶获得妊娠的机会逐渐下降。另外,随着年龄的增长,血清激素水平降低,说明下丘脑性腺轴调节发生改变、睾丸功能降低。这些变化部分是由于高龄男性生殖细胞的遗传学改变所致,包括精子细胞的遗传印记和新生突变。然而,高龄对精子密度、活动率和形态影响的研究结果并不一致,有研究认为随着年龄的增长,精子的体积、活动率及正常形态均下降,然而并不影响精子的密度。本研究显示,随着年龄的增长,精子的体积、密度及前向运动精子比率出现轻微下降的趋势,但是各组间的差异并不显著。本研究采用严格标准对精子形态学进行评估,发现36~40岁组和>40岁组的正常形态精子比率显著低于<31岁组和31~35岁组(P<0.05),这与文献报道的结果相似。理论上讲,正常形态精子比率的下降是睾丸生理机能不良的一种表现,这可能与年龄增长的生理过程是相关的。尽管高龄对精子密度、活动率和形态等参数的影响并不一致,但更令人关注的应该是精子的受精能力。本研究显示,36~40岁组的受精率显著低于<31岁组和31~35岁组(P<0.05),>40岁组的受精率也低于<31岁组和31~35岁组,但是差异并不显著,也可能与样本量小有关,这提示年龄的增长可能对IVF中精子的受精能力有一定的负面影响。另外,我们的结果显示,不同年龄分组的可移植胚胎率和优质胚胎率没有显著性差异,可能是由于母系基因组对早期胚胎的发育起主要作用,因此男性年龄不会影响早期胚胎的优质胚胎的数量。实际上,大多数研究表明男性年龄对ART患者的受精和卵裂影响很小。然而,卵裂期后胚胎内的父系基因组激活,通过对胚胎进一步发育的研究发现随着年龄的增长,Day5囊胚的形成率显著降低,Day6可冷冻的囊胚数显著降低。有研究发现随着男方年龄增长,着床率呈下降趋势,也有研究称父亲年龄对着床率没有影响。而在我们的研究中,36~40岁组和>40岁组的着床率显著低于<31岁组和31~35岁组(P<0.05),也就是随着男性年龄的增长,着床率呈现下降趋势,这说明男性年龄对着床率有负面影响。同样在既往研究中,有报道认为男性年龄对妊娠率有消极影响,也有报道显示男性年龄对妊娠率无显著影响。其中Klonoff-Cohen等的研究结果认为,男性年龄每增加1岁,妊娠失败的风险增加11% (P=0.007)。在我们的研究中,36~40岁组和>40岁组的着床率显著低于<31岁组和31~35岁组(P<0.05),也表现出随着男性年龄增长,妊娠率显著下降的趋势,说明男性高龄与IVF妊娠率降低有一定的关系。本研究还发现,随着男性年龄的增长,流产率有增高的趋势,但各组间差异没有统计学意义,这可能与样本量小有关。早期流产的影响因素很多,其中一个重要的因素是染色体异常,父母染色体异常及胚胎染色体异常均可引起流产,胚胎的遗传物质一半来自父亲,而父亲高龄与精子染色体异常相关,因此男性高龄与流产率增高相关。由此可见,男性年龄的增长可能与精液质量的下降存在一定的相关性,进而对IVF的受精率、胚胎着床率、妊娠率及流产率均产生一定的影响。但是,男性年龄对IVF临床结局的影响还是存在争议的。
本研究的不足之处是样本量小,这需要我们在将来的研究中继续扩大样本量,进行更加细致深入的研究。男性高龄对生育的影响不容忽视,因此我们要重视男性生育年龄的问题。对于接受IVF治疗的患者,我们也应该考虑到男性年龄对妊娠结局的影响,为临床工作提供理论依据。
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