不同脱颗粒细胞时间对体外受精胚胎移植的影响
文章导读:将行常规IVF治疗患者的同周期卵子分为两组( 除去完全受精失败以及受精率低下的治疗周期),即短时受精即刻脱颗粒细胞组(A组:精卵孵育4h后即刻脱颗粒细胞)和短时受精并次日晨脱颗粒细胞组(B组:精卵孵育 4h并受精后17~18h脱颗粒细胞),比较两组的受精率(2 PN率)、多精受精率(多PN率)、卵裂率、优胚率、胚胎利用率、临床妊娠率。结果:两组的受精率(2 PN率)、多精受精率(多PN率)、卵裂率、优胚率、胚胎利用率、临床妊娠率之间差异无统计学意义。 |
早在2003年, Chen等率先提出早期补救的理念并应用于临床,在加精后6h对行补救显微授精,受精率和临床结局都有明显提升。目前短时受精即刻脱颗粒观察第2极体排出情况,判断是否受精,并对未受精卵实施补救ICSI的方法已被广泛应用于临床。有研究报道,短时受精可以提高胚胎质量,但对于受精早期脱颗粒细胞的机械操作是否会影响受精、胚胎发育和临床结局,各种报道不一。现本研究对比同周期患者不同脱颗粒时间的胚胎发育情况和临床结局,报道如下。
1 资料与方法
1.1 研究对象
选择2013年4月至2013年11月在我中心接受常规体外受精- 胚胎移植的214个治疗周期,满足以下3个条件:(1)原发不孕;(2)获卵数≥7个;(3)精子质量达到行常规体外受精-胚胎移植的要求( 除去完全受精失败以及受精率低下的治疗周期)。
1.2 研究方法
1.2.1 控制性超排卵 采用长方案促排卵,于黄体中期用短效促性激素释放激素激动剂曲普瑞林(天台山制药) 0.1mg 降调节,用基因重组促卵泡生长激素果纳芬(瑞士) 或人绝经期尿促卵泡素丽申宝(丽珠制药) 促排卵,卵泡有一个达到18mm或两个达到17mm时肌肉注射HCG 10000IU ,36h后在阴道B 超引导下穿刺取卵。
1.2.2 体外受精 采用上游法或密度梯度离心法处理精液。卵子预培养3~4h后,进行微滴受精,精卵混合孵育4~5h。
1.2.3 去除颗粒细胞精卵 孵育后更换生长皿,将每个病人的卵子随机分为两组:一组即刻用拆蛋管剥除颗粒细胞并观察第二极体来判断受精情况(4h组);另一组仅更换生长皿,不剥除颗粒细胞,于次日晨即18h 后再剥除颗粒细胞(18h组)。
1.2.4 胚胎培养和移植 D1即受精后18h,观察原核评估受精情况。D3观察胚胎发育情况,按照本中心的标准评价胚胎,根据患者年龄及病史予以移植2~3个胚胎,移植后剩余胚胎发育形成优质囊胚予以玻化冷冻保存。
1.2.5 统计学分析 采用SPSS12.0软件进行分析。两组之间的各种统计学概率数据采用χ2 检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 受精率、多精受精率、卵裂率和优胚率、胚胎利用率 两组比较,受精率、多精受精率、卵裂率差异均无统计学意义(P>0.05) 。优质胚胎率、胚胎利用率B 组略高于A组 ,A 组与B 组比较差异无统计学意义(P>0.05) 。
2.2 临床妊娠率比较
临床妊娠率A组为49.15%,B组为53.00%,A组与B组比较差异无统计学意义(P>0. 05)。
3 讨论
在常规IVF周期中,约10%~25%的周期因受精失败而导致无胚胎移植。传统做法通常于次日晨即授精后18~22h行晚期单精子卵泡浆内注射(ICSI)来补救,但临床结局并不理想。近年研究提出在加精后4~6h通过判断第二极体是否排出预测受精与否,进而对未排出第二极体的卵母细胞行早期补救ICSI,可明显改善临床结局。但是关于提早去除颗粒细胞对受精以及胚胎发育和着床的影响研究报道结果不一。
3.1 对受精的影响
有研究认为, 短时受精4h即刻脱颗粒细胞会增加多PN率。在体外受精周期中多精受精和极体染色体滞留是形成多PN最主要的原因。可导致多精受精的原因包括:卵母细胞过度成熟或未成熟、透明带缺陷、精子浓度过高以及培养环境不稳定等。皮质反应和透明带反应是受精时阻止多精受精的两个重要生理功能, 影响皮质反应和透明带反应的各种因素都可能会影响正常受精。质量差的卵母细胞易出现细胞成熟度不够或老化的情况,故此类卵母细胞的皮质反应和透明带反应受到影响易发生多精受精现象。对未成熟卵来说,精子的进入不能引起卵母细胞释放皮质颗粒,并且由于细胞的内质网较少而导致缺乏足够的Ca2+振荡,使皮质反应滞后,从而发生多精受精;而卵子一旦发生老化,将不能释放或只能释放一部分的皮质颗粒,致使不能完成皮质反应,也会引起多精受精的发生。也有研究认为,若卵子成熟度欠佳,过早去除颗粒细胞可能会降低正常受精率。在体外,通常精卵孵育4h精子即可到达卵母细胞皮质,激活卵母细胞排出第二极体,在此时脱颗粒细胞并不会影响卵母细胞的正常受精。但未成熟或过熟的卵母细胞是会降低受精率。本研究结果显示, 短时授精(A组)加精后4h去除颗粒细胞没有导致异常受精率增加和正常受精率降低。因此,笔者认为影响受精的主要因素是卵母细胞的质量(不成熟或老化、透明带缺陷)和精子的浓度,精卵孵育4h已足够满足体外受精所需要的作用时间,只要培养环境适宜稳定,脱颗粒轻柔,尽量减少机械性刺激,孵育4h后去除颗粒细胞并不会导致增加异常受精和降低正常受精。这与其他一些短时受精的研究结果是相似的。
3.2 对胚胎发育和妊娠率的影响
有研究认为包裹卵子的颗粒细胞可以提供某些细胞因子,这些细胞因子对卵子的成熟以及胚胎后期的发育都有重要的作用。卵丘细胞即卵母细胞周围的多层颗粒细胞起着促进卵母细胞成熟的作用,在哺乳动物的受精过程中也起着引导精卵结合,帮助精子获能、活化和穿卵,防止透明带硬化等重要作用。但在受精之后卵丘细胞对胚胎发育的利弊,各研究结论不一。张丽红等研究发现,短时受精后去除颗粒细胞组的优胚率高于不去除颗粒细胞组,认为卵丘细胞在受精后长时间存在可能影响胚胎的发育。短时受精后去除颗粒细胞可以减少来源于精子和颗粒细胞的高浓度代谢产物,包括活性氧化物、E2、孕酮等,降低其对卵母细胞的不利影响。但也有研究认为,短时受精后脱离受精环境但保留未脱落卵丘细胞有利于胚胎发育,认为卵丘细胞做为共培养细胞可分泌一些物质,如生长因子、氨基酸、丙酮酸、糖蛋白等促进胚胎发育;同时,通过代谢途径,去除了包括金属二价阳离子、葡萄糖、次黄嘌呤等影响胚胎早期发育的物质。本研究结果显示,同患者同一周期卵母细胞在短时受精4h后即刻脱颗粒组(A组)和受精后换液次日晨脱颗粒组(B组)在卵裂率、优胚率、胚胎利用率、妊娠率之间差异不显著( P>0.05),但B组略高于A组。因此我们推测短时受精4h后,受精卵脱离了受精环境,减少了暴露在不良环境中的时间,无论即刻脱颗粒还是次日晨脱颗粒对胚胎的发育及妊娠率影响不大,而拆蛋时由于不当操作对卵母细胞可能造成的机械损伤,也许是导致A组在优胚率、胚胎利用率上略高于B组的原因,但差异无统计学意义。
综上所述, 短时受精后即刻脱颗粒细胞与次日晨脱颗粒细胞比较,可以提前观察第二极排出与否,利于早期补救ICSI, 避免受精失败,同时使ICSI治疗的适应征被进一步严格控制,还可以帮助临床判断注射hCG 的时机是否合适。短时受精4h后脱颗粒细胞对受精、胚胎发育及着床没有明显的影响,是值得推广的技术。
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