孕酮对妊娠期子宫平滑肌收缩功能及细胞内钙离子作用的临床研究
文章导读:选取足月妊娠妇女60例,其中足月临产30例,足月未临产30例。两组中采取随机数字表法各分为两组,即:A组:无催产素诱导的足月未临产组;B组:无催产素诱导的足月临产组;C组:催产素诱导足月未临产组;D组:催产素诱导的足月临产组。 将孕酮以浓度递进的方式加入已经建立规律子宫肌宫缩的实验槽中,观察子宫肌条收缩情况。同时观察免疫显光显微镜测定细胞内钙离子浓度在不同孕酮浓度和孕酮作用时间下的变化。结果:A组和B组中不同浓度的孕酮对子宫收缩波下面积的抑制率与未加孕酮时相比无统计学差异(P>0.05),C组和D组中不同浓度的孕酮对子宫收缩波下面积的抑制率与未加孕酮时相比有统计学差异(P<0.05)。孕酮浓度不同的实验组与对照组相比较,平滑肌细胞内钙离子浓度升高均降低,差异具有统计学意义(P<0.05),孕酮作用时间不同的实验组与对照组相比可发现细胞内钙离子染色剂浓度升高幅度明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。 |
在人体妊娠过程中,内分泌系统起着重要的作用,维持子宫平滑肌运动功能保持平稳,至胎儿发育成熟,发动分娩,因而产生的早产是目前科研工作者关注的热点问题,抑制子宫平滑肌就成了减少早产发生的重要途径。子宫平滑肌收缩力又与平滑肌内钙离子浓度相关,钙离子浓度通过兴奋-收缩偶联影响子宫平滑肌收缩力。 因而两者间的研究相辅相成,综合研究显得尤为重要。孕酮又称孕激素,是人类生殖过程重要的激素之一,主要功能是促使子宫内膜由增生期转为分泌期,排卵后孕酮分泌量增加。孕酮对子宫平滑肌和细胞内钙离子浓度有着十分重要的影响,作用复杂,确切作用尚无定论,因其在减少早产发生率中潜在的重要作用,值得深入研究。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2014年2月至2014年10月入院的足月妊娠妇女60例,其中足月临产30例,足月未临产30例。全部妊娠妇女均签署了本次实验知情同意书,并符合医学伦理委员会审核。在剖宫产手术中取少量(1.0g左右)子宫下段平滑肌标本。制备原代细胞,进行细胞培养。所取得的平滑肌标本中平滑肌大小,数量,活力均为在正常范围内,培养过程中严格参照人体内环境要求。
1.2 纳入标准
妊娠妇女年龄在25~35岁;健康状况良好,无任何妊娠合并症;对实验药物无过敏;均已告知本研究目的、方法及意义,自愿参加并签署同意书。
1.3排除标准
年龄小于25岁或大于35岁;无肌无力等肌肉收缩疾病;临床资料不全;未完成实验计划者。
1.4 试验方法
1.4.1 孕酮对子宫平滑肌收缩功能的影响 足月未临产者因臀位异常、家属主观因素等行择期剖宫术者,在术中胎儿娩出后取产妇子宫下段平滑肌。足月临产者在胎儿娩出中胎儿或产妇出现危险,急诊剖宫术中取产妇平滑肌。将取得的平滑肌组织处理成4mm×4mm×9mm大小,放入Krebs一Henseleit溶液中,应用生物信号多重分析装置,予以0.6g起始张力。在A、B、C、D4组中各自分别加入孕酮,使各自溶液中孕酮浓度分别为0、10-5mmol/L、10-4mmol/L、10-3mmol/L,观察子宫平滑肌收缩情况。
1.4.2 孕酮对细胞内钙离子浓度的影响 子宫平滑肌取材于足月未临产者,方法同1.3.1中方法。平滑肌组织置于D-hands溶液中,进行原代培养。对原代培养获得细胞以胰蛋白酶处理,以浓度1×105/L接种到带孔的经过处理的盖片上。在盖片孔中加入钙离子荧光剂fluo-4AM,经过CO2处理负载后,再漂洗4次,洗净多余的钙离子染色剂。将处理好的钙离子染色剂玻片加入一个特殊的玻璃小孔中。在显微镜下挑选20个状态良好的细胞:①在confocal扫描到20s时,加入浓度不同的孕酮(10-5~10-3mmol/L) 处理选取的细胞,10min后加入缩宫素。以DEME溶液替换孕酮作为对照,观察钙离子染色剂浓度的变化,制作孕酮浓度效应曲线。②在confocal扫描20s时,加入10-4mmol/L孕酮,然后在同一批细胞中分别于2、4、6、9min加入缩宫素,使用DEME替换孕酮作为对照,观察前后钙离子染色剂浓度变化。
1.5 观察指标
观察与比较子宫收缩波曲线下面积的变化和细胞内钙离子染色剂浓度随孕酮浓度与作用时间的变化。
1.6 统计学处理
采用SPSS18.0统计软件对本次研究所取得的数据进行分析,计量资料采取t检验,以均数±标准差(x±s)的形式对数据进行表示,以 P<0.05代表有统计学意义。
2 结果
2.1 孕酮对各组人妊娠子宫肌收缩波下面积抑制率的影响
子宫收缩波下面积在无缩宫素作用下,在足月临产组和足月未临产组(A组和B组)中不同浓度的孕酮对子宫收缩收缩波下面积的抑制率与未加孕酮时相比无统计学差异(P>0.05)。子宫收缩波下面积在缩宫素的作用下,在足月临产组和足月未临产组(C组和D组)中不同浓度的孕酮对子宫收缩波下面积的抑制率与未加孕酮时相比有统计学差异(P<0.05)。在足月未临产组,当孕酮浓度达到10-3mmol/L时出现统计学差异(P<0.05);在足月临产组中,孕酮浓度达到10-4mmol/L时出现统计学差异(P<0.05),且随着浓度提高,抑制率变得更加明显(P<0.01)。在缩宫素作用下的足月临产组和足月未临产组相比较时具有相当大的差异,足月临产组对比足月未临产组提高较为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.2 孕酮对催产素诱导的人妊娠子宫平滑肌细胞内钙离子染色剂浓度的影响
在DEME溶液处理过子宫肌组织后,加入缩宫素作为比照,与加缩宫素组相比,催产素组细胞内钙离子染色剂浓度升高明显,程度更大。在同一组中,分别使用浓度不同的孕酮处理子宫平滑肌细胞5min,之后再加入相同浓度缩宫素,可看出细胞内的钙离子浓度有小幅升高。各组与对照组相比较,平滑肌细胞内钙离子浓度升高均降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。以人类妊娠末期体内孕酮浓度10-4mmol/L作为实验浓度。
2.3 孕酮作用时间对细胞内钙离子染色剂浓度的影响
用DEME溶液处理平滑肌细胞后加入缩宫素空白对照组,可发现空白对照组内钙离子染色剂浓度迅速升高,而且升高幅度大。在孕酮处理平滑肌细胞2、4、6、9min后再加入缩宫素,与对照组相比,可发现细胞内钙离子染色剂浓度升高幅度明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
人类妊娠过程十分复杂,内分泌系统对子宫平滑肌具有的兴奋和抑制的作用,两者间的相互拮抗控制着妊娠妇女的生产时间,而过于兴奋的子宫平滑肌将导致早产,虽然现在早产儿的营养支持和治疗已经有了很大提高,但早产仍然是产科新生儿死亡的重要原因。因而孕酮在调节子宫收缩方面的研究就显得十分必要。孕酮又称为黄体酮,由卵巢黄体分泌的激素,在促使子宫内膜由增生期转为分泌期具有重要作用。在雌激素的协同下,可以促使乳腺腺体增生和肥大,促进乳腺生长。与雌激素作用相反,孕激素具有排水拍钠作用。孕酮对女性体温也有重要影响,在排卵期体温最低时,孕酮可提高女性体温。与此同时,孕酮对子宫平滑肌收缩的具体影响国内外研究尚未完全阐明,有报道认为孕酮及孕酮代谢产物可以减少子宫收缩的频率和幅度,而另有报道却认为孕酮可以提高子宫收缩的频率及张力。我们的研究认为,孕酮对于子宫平滑肌的收缩作用具有抑制作用,而且具有浓度和时间依赖性。钙离子是常见的细胞内第二信使,在平滑肌兴奋收缩偶联中发挥重要作用,细胞内钙离子的浓度是调节平滑肌收缩力的关键。妊娠过程中,内分泌系统激素通过调节肌质网来调节细胞内钙离子浓度,进而改变平滑肌细胞的收缩-舒张状态。在孕酮对妊娠期子宫平滑肌细胞内钙离子浓度的影响方面,国内外研究尚少见,本实验发现,孕酮可以明显降低催产素诱导的子宫平滑肌内钙离子浓度的提高,根据正常妊娠妇女体内孕酮的浓度10-4mmol/L,故选择该浓度为实验浓度。该浓度下,孕酮对子宫收缩具有很强的一直效应,而且可以看出存在浓度和时间依赖性,进而可以用于预防和治疗早产。孕激素在此方面的应用前景广阔,具有重大的医疗价值和经济价值。综上所述,孕酮可降低子宫平滑肌收缩及细胞内钙离子的浓度,对于减少早产的发生可以发挥重要的作用,值得深入研究及在临床推广应用。
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