血管紧张素Ⅱ对精子运动参数和胞内钙离子的影响
文章导读:目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)体外对不育症精子运动参数和胞内钙离子的影响。方法:不同浓度的AngⅡ在体外与经上游优化处理的不肓症精子分别共同孵育20、40min,采用计算机辅助精子分析(CASA)检测人精子运动参数;荧光分光光度计检测胞内游离Ca²+荧光强度的变化。结果:AngⅡ(10nmol/L和lOOnmol/L)在体外能显着提高不育症精子活率及运动参数(P<0.05),并激发胞内Ca²+快速升高(P<0.001);Losartan(AngⅡ受体ATl拮抗剂)、EGTA可以明显阻断和抑制这些过程。结论:AngⅡ在体外可以显着增高不育症患者精子的运动参数,其结果可能是通过人精子膜上的ATl受体结合作用后使胞外Ca²+内流而实现的。 |
在男性生殖研究中,对于男性不育症的研究内容越来越多。最近几年发现局部肾素—血管紧张素系统(renin—angiotensin system,RAS)在男性生殖调节中具有重要作用,其主要效应物质AngⅡ可以提高精子的活动力,诱发机体反应,促进授精能力。本实验目的是观察AngⅡ在体外对男性不育症精子运动参数及胞内Ca²+的影响和可能的作用途径,来进一步阐明其在生殖调节中的作用及临床意义,以推动AngⅡ对男性不育症发病机制的认识及在人类辅助生殖和动物繁殖中的运用。
1 材料与方法
1.1 试剂
人AngⅡ、FITC—PSA、Earle's液、EGTA(Sigma公司),ATl特异性拮抗剂Losartan(杭州默沙东公司),Fura—2/AM(Biotium公司),孕酮(天津金耀氨基酸公司),金标免疫斑点试剂盒(篮波生物技术研究所),人血清白蛋白(华兰生工),其余试剂均为国产分析纯品。
1. 2 研究对象及精子悬液制备
按WHO标准筛选32例精液常规正常、抗精子抗体阴性的男性不育症患者。年龄23~35岁,不育年限2年以上,禁欲3~7天后,自慰法取得全份新鲜精液标本,置37℃水浴20~30min完全液化后,按文献方法经上游法优选后离心洗涤,重复2次,然后以0.5ml Earle's液悬浮。同一患者经上述处理制备的精子悬液混合于一无菌玻璃试管,精子密度用血球计测定并用Earle's液调整至20×106个细胞/ml,标本置37℃恒温孵育箱中备用,32例患者配偶经妇产科常规检查正常。
1.3 实验分组和方法
将同一患者制备好的精子悬液分成4组,分装于4支试管内。第1管为对照组(第1组),第2管为1Onmol/L AngⅡ组(第2组),第3管为1OOnmol/L AngⅡ组(第3组),第4管为EGTA+100nmol/L AngⅡ组(第4组)。首先在第4管中加入EGTA使其终浓度为1mmol/L,4管共同孵育5min,随后在第2、3管中分别加入AngⅡ使其终浓度为1Onmol/L和100nmol/L,上述各支试管混合液总体积均为0.3ml,精子密度均调整至20×10^6ml。将各支试管轻轻振荡后置于37℃恒温水浴箱中孵育,分别于20、40min时各取5μl用CASA(北京伟力公司)进行分析,每份标本观测10个视野,观察精子数不少于200个。