宫颈上皮内瘤变患者高危型人乳头状瘤病毒感染与吲哚胺2,3-二氧酶表达的关系
文章导读:采用第二代杂交捕获法检测高危型HPV,免疫组化法检测吲哚胺2,3-二氧酶表达。结果:高危型HPV感染与吲哚胺2,3-二氧酶同时阳性的患者占62.91%(95例/151例),同时阴性的患者占21.85%(33例/151例)。高危型HPV感染阳性的患者宫颈组织中吲哚胺2,3-二氧酶阳性表达率显著高于高危型HPV感染阴性患者。高危型HPV与吲哚胺2,3-二氧酶表达有相关性。 |
高危型人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是导致宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)、宫颈癌的主要因素。吲哚胺2,3-二氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是色氨酸代谢的重要关键酶,目前研究发现IDO与多种肿瘤发生、发展密切相关。我们对高危型HPV与宫颈上皮内瘤变组织中IDO表达水平进行研究,探讨高危型HPV与IDO之间的关系。
1 资料和方法
1.1 研究对象
选取2011年1月至2012年12月在我院行高危型HPV DNA检测,经阴道镜引导下宫颈活检病理确诊为CIN的患者共151例。其中轻度不典型增生,即CINⅠ50例,年龄23~39岁,平均年龄(27.1±3.5)岁;中度不典型增生,即CINⅡ51例,年龄24~38岁,平均年龄(27.5±3.2)岁;重度不典型增生,即CINⅢ50例,年龄22~39岁,平均年龄(27.3±3.4)岁。上述患者平均年龄相比较无统计学差异,无高血压、冠心病、糖尿病、肝炎、肾炎、结核、免疫系统疾病等。
1.2 高危型HPV-DNA检测
将取样刷置于宫颈管内轻轻旋转一周后,将采样刷置于STM标本保存液中,4℃保存。运用第二代杂交捕获法进行检测,具体检测方法参照试剂盒说明书进行,检测HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68共15种高危型HPV-DNA。
1.3 IDO蛋白检测
采用免疫组织化学法,按照试剂盒说明书进行操作。抗人IDO多克隆抗体试剂购自美国Invitrogen公司。用已知IDO阳性的胎盘组织切片作为阳性对照, PBS液代替一抗作为阴性对照,显微镜下分析组织切片的显色反应。
1.4 结果判定标准
高危型HPV:相对光读数/临界值≥1.0的标本为阳性,相对光读数/临界值<1.0的标本为阴性。
IDO:以细胞浆内出现棕黄色颗粒,染色强度高于背景非特异性染色者为阳性细胞。每张切片在高倍镜下观察5个不同视野,各计数200个细胞。阳性细胞数≤5%为阴性,阳性细胞数6%~25%为弱阳性,阳性细胞数26%~50%为阳性,阳性细胞数>50%为强阳性。
1.5 统计学分析
采用SPSS13.0统计学软件进行分析,以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
对高危型HPV感染与宫颈组织中IDO表达进行分析,发现高危型HPV感染与IDO同时阳性的患者占62.91%(95/151),同时阴性的患者占21.85%(33/151)。高危型HPV感染阳性的患者宫颈组织中IDO阳性表达率显著高于高危型HPV感染阴性患者(χ2=62.1833,P<0.001)。采用相关分析表明高危型HPV与IDO表达有相关性(r=0.9611,P<0.05)。
3 讨论
高危型HPV的DNA检测是直接针对病因的检查,能将宫颈上皮内瘤变、宫颈癌的妇女筛选出来。目前研究证明,高危型HPV是宫颈上皮内瘤变、宫颈癌疾病发病的必要条件。
色氨酸是细胞维持活化和增殖所必需的氨基酸。IDO是存在于细胞质内以亚铁血红素作为唯一辅基的单链多肽,是人体内重要的肝外唯一催化色氨酸沿犬尿氨酸途径分解代谢的限速酶。早期研究发现IDO通过降解色氨酸从而达到抗菌的作用。因此,IDO能有效抑制母胎之间T细胞的免疫反应,发挥免疫抑制作用。IDO空间构象中IDO折叠呈两个大小不等的α螺旋结构域,亚铁血红素辅基和催化位点位于两个α螺旋之间。正常时IDO无活性,当亚铁血红素辅基与氧结合后从底物中吸收质子后获得氧化活性从而激活IDO。IDO基因的启动子长1245bp,包含对干扰素刺激反应序列,因此,干扰素可以在转录水平调控IDO。IDO广泛分布于肝外组织中特别是黏膜组织、上皮细胞、纤维细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。正常情况下组织中IDO呈低水平表达,在发生炎症、感染和细胞因子作用时,表达明显升高,进而细胞微环境中的色氨酸大量消耗,在导致机体色氨酸匮乏的同时产生的代谢产物,在肿瘤微环境的聚集可引起抗肿瘤免疫抑制反应,可诱导母胎免疫耐受、抑制T细胞和NK细胞免疫、介导肿瘤免疫逃逸、诱导移植物免疫耐受等。目前研究发现,在多种肿瘤细胞内IDO表达显著升高。1986年Hiroaki首次报道IDO在肺癌组织中的表达明显增强。目前研究发现在头颈部癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌等中都有IDO的表达增高。
我们研究发现对高危型HPV感染与宫颈组织中IDO表达进行分析,发现高危型HPV感染与IDO同时阳性的患者占62.91%(95/151),同时阴性的患者占21.85%(33/151)。高危型HPV感染阳性的患者宫颈组织中IDO阳性表达率显著高于高危型HPV感染阴性(P<0.01)。采用相关分析表明高危型HPV与IDO表达有相关性(P<0.05),与相关文献报道相符。综上结论,高危型HPV感染与宫颈上皮内瘤变中IDO表达水平呈正相关性,由于IDO参与机体炎症、肿瘤免疫耐受机制,因此可将IDO表达水平作为观察宫颈上皮内瘤变乃至宫颈癌的重要指标。
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