山东省女性HPV6/11和HPV16/18感染情况分析
文章导读:采用实时荧光定量PCR技术,对2012年1月至2016年6月间济南金域医学检验中心收集的3995例和7508例样本,分别进行HPV6/11或HPV16/18检测,并对检测结果进行回顾分析。结果:HPV6/11检测的阳性率为27.2%(1085/3995),明显高于HPV16/18检测的5.1%(384/7508)。两种HPV检测的阳性率呈现不对称双峰分布,均以<20岁组阳性率最高,分别为35.5%和21.7%。随后HPV6/11和HPV16/18的阳性率随年龄增长而逐渐下降,后HPV6/11的阳性率又逐渐升高至51~60岁组的34.3%和>60岁组的43.8%;HPV16/18检测的阳性率在>60岁组也略有上升,为3.4%。各地区中鲁中(31.6%)和鲁西(30.6%)HPV6/11的阳性率要高于鲁东(22.1%)和鲁北(21.7%);HPV16/18的检出率以鲁中(16.3%)最高,而鲁东最低(4.1%)。 |
人乳头状瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染在人群中较普遍,主要是通过性活动传播。根据HPV亚型致癌危险性的不同,分为低危型、高危型两大类。低危型HPV包括6、11等亚型,主要导致外生殖器等部位的尖锐湿疣;高危型HPV包括16、18等亚型,除可引起生殖器疣外,更是女性子宫颈癌以及男女性外生殖器癌、肛门癌和喉癌等的主要致癌因素。Silvia de Sanjose等报道,宫颈70%的鳞癌和82%的腺癌与HPV16/18感染有关。雷振春等报道,79.6%的女性尖锐湿疣,由HPV6/11感染导致。鉴于HPV6/11在尖锐湿疣,以及HPV16/18在宫颈癌发病中扮演的重要角色,只要阻断这些HPV感染,就可以阻止大部分尖锐湿疣和宫颈癌的发生。日前,葛兰素史克的HPV16/18疫苗已获得了国家食品药品监督管理局的上市许可,成为国内首个获准上市的HPV疫苗。而另一个4价HPV(6/11/16/18)疫苗已完成临床试验和数据的整理,也有望明年获准上市。研究报道HPV的年龄和地区分布具有不同的分布特征,这对HPV预防和治疗政策的制定具有重要意义。但是,目前关于山东地区女性HPV感染的流行病学缺乏系统的调查,仅局限于济南、青岛、东营等少数地区,研究群体规模较小,阳性率也高低不一,从17%~67%不等。本研究旨在通过对山东省女性HPV6/11和HPV16/18感染检测结果的回顾分析,了解山东省各年龄段、各地区女性HPV的感染状况,为女性尖锐湿疣和子宫颈癌的预防,以及HPV疫苗的接种提供科学依据。
1 资料与方法
1.1 研究对象
从2012年1月至2016年6月,我们对由济南金域医学检验中心收集的,来自我省各市245家医院和体检中心女性就诊者的3995例和7508例样本,分别进行了HPV6/11和HPV16/18检测。
1.2 主要试剂及仪器
HPV 6/11和16/18检测试剂盒由美国Digene公司提供,ABI7300实时荧光定量PCR仪为美国Applied Biosystems公司生产。
1.3 检测方法
HPV6/11和16/18试剂盒分别采用一对PCR引物和一个荧光双标记的探针,探针能分别与HPV6/11或16/18引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合,从而将PCR技术和荧光检测技术结合起来,可分别检测HPV6/11和HPV16/18的DNA。按照试剂盒说明书提取样本DNA后,加入到已配制好的PCR反应管中,同时设置阴、阳性对照,按厂家说明书进行PCR扩增程序设置,上机扩增,反应结束后分析扩增曲线。基线取6~15个循环的荧光信号,阈值设为刚好超过正常阴性对照时的扩增曲线。Ct值等于40.0或0.0为阴性,Ct值≤38.0为阳性,Ct值介于38.0~40.0间时对样本再次进行检测,若结果显示Ct值<40则为阳性,否则为阴性。
1.4 统计学分析
数据按不同年龄和不同地区分布进行汇总,并采用SPSS19.0软件进行统计学分析。连续变量两组数据间的比较使用t检验,多组间的比较使用方差分析,并用Bonferoni法进行两两比较。分类变量的比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 研究人群基本信息
在4年半时间内,济南金域基因室总共完成了HPV6/11样本3,995例,HPV16/18样本7508例的检测工作。HPV检测结果按年分布的具体信息见表1。HPV16/18检测患者的平均年龄为41.7岁,明显高于HPV6/11检测患者的30.5岁(F=49.03,P<0.001)。与之相反,患者HPV 6/11的总阳性率为27.2%,要明显高于HPV 16/18检测的5.1%(χ2=1137.504,P<0.001)。
2.2 不同年龄女性HPV阳性率比较
HPV6/11检测标本主要集中于20~40岁组,尤其是21~30岁组,总占比69.1%(2761/3995);而HPV16/18检测则比较均匀地分布于21~30岁、31~40岁、41~50和51~60岁组,总占比86.2%(6472/7508)。不同年龄组HPV检出率比较,HPV6/11(χ2=41.334,P<0.001)和HPV16/18(χ2=127.06,P<0.001)检测的阳性率均有明显差别。两种HPV检测的阳性率均以<20岁组阳性率最高,分别为35.5%和21.7%。随后的21~30岁组、31~40岁组和41~50岁组,HPV6/11检测的阳性率逐渐下降,后又逐渐升高至51~60岁组的34.3%和>60岁组的43.8%。HPV16/18检测的阳性率,在21~30岁组、31~40岁组、41~50岁组和51~60岁组,也呈逐渐下降趋势,后在>60岁组略有上升,为3.4%。
2.3 不同地区女性HPV感染阳性率比较
山东省按传统分为鲁中(济南,淄博,莱芜,泰安)、鲁东(烟台,青岛,威海,潍坊)、鲁南(临沂,日照,济宁,枣庄)、鲁西(聊城,菏泽)、鲁北(东营,滨州,德州)5个地区。HPV6/11(F=12.093,P<0.001)和HPV16/18(F=164.312,P<0.001)检测的平均年龄均有明显差别。其中,各地区HPV6/11检测的平均年龄以鲁北最低,为27.5岁;各地区HPV 16/18检测的平均年龄以鲁东最高,为43.3岁。不同地区HPV检出率比较,HPV 6/11(χ2=38.379,P<0.001)和HPV 16/18(χ2=99.777,P<0.001)检测的阳性率分布均具有明显差异。鲁中(31.6%)和鲁西(30.6%)的HPV 6/11检出率较高,而鲁东(22.1%)和鲁北(21.7%)阳性率要低一些;HPV 16/18的检出率以鲁中(16.3%)为最高,鲁东最低(4.1%)。
3 讨论
本研究采用美国Digene公司针对HPV 6/11和HPV 16/18 DNA的检测试剂盒,通过实时荧光定量PCR技术对HPV进行检测,该方法迅速、简便、灵敏,并可定量,可为HPV检测提供可靠结果。本研究结果显示,山东省女性HPV6/11和HPV16/18感染的分布具有年龄和地区分布的特异性。研究显示,持续的高危型HPV感染,特别是16/18型感染,是诱发宫颈癌的主要病因学因素。近年来的随机对照研究显示,采用高危型HPV作为宫颈癌一线筛查方法,并用HPV16/18进行分流,能更多和更早的发现宫颈癌及其癌前病变,能进一步降低宫颈癌的患病风险,这可以延长筛查间隔,并减少了巴氏涂片的使用率,并可能降低筛查成本。HPV检测方法与细胞学筛查相比,简单易行,不需要专业细胞病理医生的参与。我国宫颈癌筛查目前缺乏专业的细胞学培训机构、从业人员严重不足、素质参差不齐,导致漏诊率居高不下,因而HPV检测作为我国宫颈癌一线筛查手段具有较高的实用性。本研究结果显示,HPV6/11的阳性率为27.2%,要明显高于HPV16/18检测的5.1%。分析原因,首先低危型HPV和高危性HPV检测的临床目的不同。低危型HPV6/11主要是诊断或排除外阴等部位的尖锐湿疣病变,针对的是性活跃的年轻人群,而这些人群的HPV感染率偏高。高危型HPV检测则主要是为了进行宫颈癌的筛查和诊断,指南推荐HPV筛查只适用于30岁以后的有较长性生活史的年长女性。而随着年龄的增长,HPV病毒被机体清除,因而HPV阳性率较低。本研究中HPV16/18检测患者的平均年龄为41.7岁,明显高于HPV6/11检测患者的30.5岁,这可能是HPV6/11检测阳性率明显高于HPV16/18的主要原因。另外,HPV6/11和16/18的阳性检出率与我们实验室2016年初报道的,使用基因芯片(23分型)技术的结果有一定的差别。基因芯片检测结果显示,HPV6/11的检出率为7.3%,HPV16/18的检出率为8.2%。造成这一差别的原因,一方面可能在于人群选择的偏差,另一方面在于检测方法和试剂不同。已有多个研究报道证实,HPV的感染与年龄存在相关性,年龄是HPV感染的重要影响因素之一。Malano等和Baseman等的研究结果均显示,HPV的感染率随年龄的增长而呈U型分布,25岁以下及55岁女性分别为感染的两个高峰期,这也跟我们2016年初报道的山东省8万余例高危型HPV检测结果相一致。本研究结果显示,HPV6/11和HPV16/18检测均以<20岁组阳性率最高,分别为35.5%和21.7%,后随年龄的增加逐渐下降,但在50岁和60岁以后,又分别有所回升。呈现此种分布主要原因可能在于,第一高峰年龄段女性性生活活跃,免疫系统未被致敏,故感染率较高,但病毒则易被清除,此阶段感染大部分为暂时性。对于50岁以上的女性,随着年龄增长,雌激素水平降低,机体抵抗力也降低,容易导致HPV感染,同时也容易激活潜伏感染,同时机体对病毒清除能力下降,这可能是导致HPV感染阳性率又有所回升的重要原因。2012年的一项对100万余例女性HPV检测结果进行分析后的结果显示,HPV感染的分布具有地域的不一致性,世界不同地区的HPV感染率参差不齐。西亚(1.7%)和北美(4.7%)最低,东非(33.6%)和加勒比海地区(35.4%)则最高。2013年和2015年的两项大型研究也显示国内各地区的阳性率存在较大差异,从9.9%~31.9%不等。部分研究报道也显示,山东各地区女性HPV感染的阳性率也高低不一,从17%~67%不等。本研究也显示鲁中(31.6%)和鲁西(30.6%)的HPV6/11阳性率较高,而鲁东(22.1%)和鲁北(21.7%)的阳性率要低一些;HPV16/18的阳性率以鲁中(16.3%)为最高,而鲁东(4.1%)最低。分析各地区HPV阳性率不一致的原因,首先与各地区人群年龄构成不一致有关,如各地区HPV 16/18检测的平均年龄以鲁东最高,为43.3岁,其HPV16/18阳性率也最低。另外,HPV阳性率的不同地区差异还可能与各地不同的教育水平、生活习惯、经济及社会发展、思想开放程度等不一致有关。山东的经济发展,明显不均衡,鲁东的经济和社会发展水平,明显要比鲁西、鲁南和鲁北更发达,居民的性安全意识较强,因而其HPV6/11和HPV16/18的感染率也相对较低。总之,本研究结果能反应山东省女性低危型HPV6/11和高危型HPV16/18感染的分布情况,这对掌握本地区女性的HPV感染流行病学特征,为宫颈癌筛查,以及获批上市二价HPV疫苗和即将获得批准的四价疫苗的接种,提供科学依据。
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